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重组蛋白A预装柱填料

蛋白A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。使用的rec-Protein A是通过基因工程-重组蛋白的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点，特异性更好。

本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术，将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化，使得单位体积中结合更多蛋白A，最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化，或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。

蛋白A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。使用的rec-Protein A是通过基因工程-重组蛋白的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点，特异性更好。

本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术，将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化，使得单位体积中结合更多蛋白A，最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化，或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。

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l 产品技术指标

rec-Protein A/Sepharose 比值：2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose

rec-Protein A分子量：34.85 KDa

每分子rec-Protein A可结合IgG位点数：4个

rec-Protein A可结合白蛋白位点数：无

线性流速：300-500 cm/h

耐压指数：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事项

请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时，将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温，恢复至室温使用。

l 产品保存

产品储存于2-8℃，保质期两年。

l rec-Protein A预装柱纯化IgG抗体步骤

以下实验方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体，不同来源的IgG与rec-Protein A的结合能力不同，具体情况请参考表1。

1. 将血清或腹水样品（推荐上样量2 mL样品/mL柱）装入截留分子量3.5 KDa透析带中，于4 ℃冰箱中对1× PBS（pH 7.4）透析过夜；

2. 将rec-Protein A-Sepharose装柱固定好，用10倍柱体积1× PBS（pH 7.4）平衡层析柱，建议流速为1 mL/min；

3. 将透析好的样品从层析柱上端加入，建议流速为1 mL/min，为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样，重复2遍（或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30 min）；

4. 样品结合后，用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱，建议流速为1 mL/min，勿让层析柱滴干；

5. 洗脱IgG，向层析柱上端加入洗脱液（100 mM甘氨酸，pH 2.7），用预先加有100 μL中和缓冲液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱体积，进行10 % SDS-PAGE电泳，确定IgG样品所在管，回收样品。

6. 用5倍柱体积再生缓冲液（100 mM甘氨酸，pH 2.0）进行再生处理，再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。最后于层析柱中加入10倍柱体积, 20% Ethanol，4~8 ℃冰箱保存处理。

l 同类产品纯化效果比较

美国某知名品牌的rProtein A Sepharose 4FF 亲和层析柱对人血清进行纯化，其对人IgG的最大结合量约为34 mg/mL Medium。

表1 rProtein A与不同来源Ig的反应活性情况

IgG类型	Protein A	IgG类型	Protein A	IgG类型	Protein A
人 IgG1	++++	小鼠 IgG2b	+++	仓鼠 Ig	+
人 IgG2	++++	小鼠 IgG3	++	豚鼠 Ig	++++
人IgG3	-	小鼠 IgM	+/-	牛 Ig	++
人IgG4	++++	大鼠 IgG1	-	马	++
人IgA	++	大鼠 IgG2a	-	奶牛	++
人n IgD	++	大鼠 IgG2b	-	猪	+++
人IgE	++	大鼠 IgG2c	+	绵羊	+/-
人 IgM	++	大鼠 IgM	+/-	山羊	-
小鼠 IgG1	+	兔 Ig	++++
小鼠 IgG2a	++++	鸡 Ig	-

表2 rProtein A预装柱系列产品参数

特性	rProtein A	特性	rProtein A
柱体积规格	1mL，5mL	填料稳定性	＞20纯化周期
基质组成	4%高交联度琼脂糖	pH稳定性	pH 2~11
基质平均粒径	90μm	推荐工作pH范围	pH 3~10
功能基团	rProtein A：34.85kDa； IgG结合位点：4	推荐在位清洗pH范围	pH 2~11
配基密度	≈3mg rProtein A/mL 基质	工作温度	4~40℃
结合能力	30-55mg人IgG/mL填料	运输条件	20%乙醇浸泡，室温运输
推荐流速	30~150cm/mL	贮藏条件	20%乙醇条件下， 4~8℃保存